ПЦР

ПЦР / полимеразная цепная реакция. Взгляд специалиста

Уважаемые жители Брянска и Брянской области!

Вот  уже 15 лет я занимаюсь полимеразной цепной реакцией, из которых- 2 года в ЦГСЭН г. Брянска и 13 лет в частной ПЦР лаборатории ООО «Медицина для Вас». За эти годы многое изменилось в плане постановки ПЦР анализа. 15 лет назад мы, тогда ещё сотрудники ЦГСЭН г. Брянска, начинали работать на несовершенных тест - системах, которые требовали соединения многих компонентов. Сейчас процесс постановки ПЦР значительно упрощён, ручной труд сведён к минимуму, вся техника, которая используется в лаборатории, имеет программное обеспечение.

Как специалист я подтверждаю – метод ПЦР точен, надёжен, дает достоверные результаты. Если только находится в надежных руках. Термин ПЦР сейчас у всех «на слуху», но мало кто знает, что же представляет из себя метод ПЦР анализа при диагностике ЗППП. Итак:

1-й этап. Разрушение механическим и термическим путём микробных тел, выделение ДНК.

2-й этап. «Умножение» ДНК, получение огромного количества участков ДНК, характерных, специфичных для того или иного микроорганизма.

3-й этап. Получение видимого результата размноженной  ДНК.

Что такое ПЦР анализ

ПЦР это полимеразная цепная реакция (Polymerase chain reaction, PCR diagnostics).

ПЦР анализ это - метод лабораторной диагностики инфекционных заболеваний, этот метод широко применяется для диагностики ЗППП.

ПЦР была открыта в 1986 г. американским биохимиком фирмы « Cetus» Кэри Мюллисом. В 1993 г. за разработку метода ПЦР К. Мюллис был награждён самой престижной научной наградой — Нобелевской премией.

Полимеразная цепная реакция позволяет выявить в исследуемомклиническом материале (кровь, мазки, соскобы из уретры, цервикального канала) наличие специфического участка ДНК, характерного для исследуемого микроорганизма, многократно размножить его (амплифицировать) в процессе повторяющихся температурных циклов и получить видимое изображение реакции.

ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) – это высокомолекулярное природное соединение, являющееся носителем генетической информации. ДНК каждого организма строго индивидуальна и определяет его особенности (признаки). ДНК точно воспроизводится при делении клеток, что обеспечивает передачу наследственной информации в ряду поколений.

Открытию полимеразной реакции, сопутствовало развитие некоторых технологий. В частности, появление приборов, позволяющих автоматически синтезировать фрагменты ДНК. В тот же период были открыты микроорганизмы, живущие в гейзерах. Оказалось, что их ферментная система не только выдерживает высокие температуры горячих источников, но и сохраняет в этих условиях свою биологическую активность. Ферменты этих микроорганизмов используются в ПЦР анализах, т.к. процесс амплификации (получения копий ДНК) протекает при температуре, достигающей 95 градусов.

В ПЦР лаборатории ООО «Медицина для вас» используется оборудование:

Центрифуга «Фуга -  вортекс Микро Спин FV - 2400» (производство Латвия).

Микроцентрифуга «Minispin» (производство Германия).

Термостат твердотельный «Термит» (ООО «НПО ДНК - Технология» г. Москва).

Амплификатор «Терцик» НС - 2 с дисплеем (ООО «НПО ДНК - Технология» г. Москва).

Амплификатор «Терцик» МС 2 с дисплеем (ООО «НПО ДНК - Технология» г. Москва).

Источник питания «Эльф - 4» и камера для электрофореза «SE - 2» (ЗАО «НПФ ДНК - Технология» г. Москва).

Видеосистема GL - 2 (ЗАО «НПФ ДНК - Технология» г. Москва).

Все тест - системы для постановки ПЦР реакций имеют регистрационные удостоверения. Производитель тест - систем - НПФ «Литех» Научно — исследовательского института физико - химической медицины (г. Москва).

ПЦР оборудование

Мне хотелось бы обратить ваше внимание на следующее — в нашей практике приходится сталкиваться с двумя явлениями:

  1. Ингибиция. Это «подавление реакции», то есть, реакции «не проходят». Причины ингибиции могут быть разными — наличие в биопробе пациента слизи, большого количества крови, мочевины, лекарственных препаратов. В случае ингибиции требуется повторить реакцию, а ещё лучше — взять повторно биоматериал у пациента и повторно провести ПЦР анализ. Скрывать факты ингибиции нельзя, в противном случае будут выданы ложноотрицательные результаты.
  1. Контаминация. Это довольно опасное явление, которое может произойти в любой лаборатории (будь то маленькая лаборатория лечебного учреждения или же лаборатория научно – исследовательского института) из-за нарушения дез. режима. ДНК в таких случаях «выходит из под контроля человека», может подняться в воздух, загрязнить поверхности столов и попасть в реакцию. В таких случаях появятся ложноположительные результаты. Поддерживать дез. режим на должном уровне и устранить нарушения правильно и грамотно могут только специалисты, имеющие специальную подготовку для работы с микроорганизмами и ДНК.

Я желаю вам не ошибиться с выбором лаборатории. и доверять только опытным специалистам.

Будьте здоровы! Руководитель ООО «Медицина для вас», зав. ПЦР — лабораторией, врач  Кульбакова О.М.

С уважением, ООО «Медицина для вас»