ПЦР

ПЦР / полимеразная цепная реакция. Взгляд специалиста

Уважаемые жители Брянска и Брянской области!

Вот  уже 15 лет я занимаюсь полимеразной цепной реакцией, из которых- 2 года в ЦГСЭН г. Брянска и 13 лет в частной ПЦР лаборатории ООО «Медицина для Вас». За эти годы многое изменилось в плане постановки ПЦР анализа. 15 лет назад мы, тогда ещё сотрудники ЦГСЭН г. Брянска, начинали работать на несовершенных тест системах, которые требовали соединения многих компонентов. Сейчас процесс постановки ПЦР значительно упрощён, ручной труд сведён к минимуму, вся техника, которая используется в лаборатории, имеет программное обеспечение.

Как специалист я подтверждаю – метод ПЦР точен, надёжен, дает достоверные результаты. Если только находится в надежных руках. Термин ПЦР сейчас у всех «на слуху», но мало кто знает, что же представляет из себя метод ПЦР анализа при диагностике ЗППП. Итак:

1-й этап. Разрушение механическим и термическим путём микробных тел, выделение ДНК.

2-й этап. «Умножение» ДНК, получение огромного количества участков ДНК, характерных, специфичных для того или иного микроорганизма.

3-й этап. Получение видимого результата размноженной  ДНК.

Что такое ПЦР анализ

ПЦР это полимеразная цепная реакция (Polymerase chain reaction, PCR diagnostics).

ПЦР анализ это метод лабораторной диагностики инфекционных заболеваний, этот метод широко применяется для диагностики ЗППП.

ПЦР была открыта в 1986 г. американским биохимиком фирмы » Cetus» Кэри Мюллисом. В 1993 г. за разработку метода ПЦР К. Мюллис был награждён самой престижной научной наградой — Нобелевской премией.

Полимеразная цепная реакция позволяет выявить в исследуемомклиническом материале (кровь, мазки, соскобы из уретры, цервикального канала) наличие специфического участка ДНК, характерного для исследуемого микроорганизма, многократно размножить его (амплифицировать) в процессе повторяющихся температурных циклов и получить видимое изображение реакции.

ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) – это высокомолекулярное природное соединение, являющееся носителем генетической информации. ДНК каждого организма строго индивидуальна и определяет его особенности (признаки). ДНК точно воспроизводится при делении клеток, что обеспечивает передачу наследственной информации в ряду поколений.

Открытию полимеразной реакции, сопутствовало развитие некоторых технологий. В частности, появление приборов, позволяющих автоматически синтезировать фрагменты ДНК. В тот же период были открыты микроорганизмы, живущие в гейзерах. Оказалось, что их ферментная система не только выдерживает высокие температуры горячих источников, но и сохраняет в этих условиях свою биологическую активность. Ферменты этих микроорганизмов используются в ПЦР анализах, т.к. процесс амплификации (получения копий ДНК) протекает при температуре, достигающей 95 градусов.

В ПЦР лаборатории ООО «Медицина для вас» используется оборудование:

Центрифуга «Фуга   вортекс Микро Спин FV 2400» (производство Латвия). Микроцентрифуга «Minispin» (производство Германия). Термостат твердотельный «Термит» (ООО «НПО ДНК Технология» г. Москва). Амплификатор «Терцик» НС 2 с дисплеем (ООО «НПО ДНК Технология» г. Москва). Амплификатор «Терцик» МС 2 с дисплеем (ООО «НПО ДНК Технология» г. Москва). Источник питания «Эльф 4» и камера для электрофореза «SE 2» (ЗАО «НПФ ДНК Технология» г. Москва). Видеосистема GL 2 (ЗАО «НПФ ДНК Технология» г. Москва). Все тест системы для постановки ПЦР реакций имеют регистрационные удостоверения. Производитель тест систем НПФ «Литех» Научноисследовательского института физико химической медицины (г. Москва).

ПЦР оборудование

Мне хотелось бы обратить ваше внимание на следующее — в нашей практике приходится сталкиваться с двумя явлениями:

  1. Ингибиция. Это «подавление реакции», то есть, реакции «не проходят». Причины ингибиции могут быть разными — наличие в биопробе пациента слизи, большого количества крови, мочевины, лекарственных препаратов. В случае ингибиции требуется повторить реакцию, а ещё лучше — взять повторно биоматериал у пациента и повторно провести ПЦР анализ. Скрывать факты ингибиции нельзя, в противном случае будут выданы ложноотрицательные результаты.
  1. Контаминация. Это довольно опасное явление, которое может произойти в любой лаборатории (будь то маленькая лаборатория лечебного учреждения или же лаборатория научно – исследовательского института) из-за нарушения дез. режима. ДНК в таких случаях «выходит из под контроля человека», может подняться в воздух, загрязнить поверхности столов и попасть в реакцию. В таких случаях появятся ложноположительные результаты. Поддерживать дез. режим на должном уровне и устранить нарушения правильно и грамотно могут только специалисты, имеющие специальную подготовку для работы с микроорганизмами и ДНК.

Я желаю вам не ошибиться с выбором лаборатории. и доверять только опытным специалистам.

Будьте здоровы! Руководитель ООО «Медицина для вас», зав. ПЦР — лабораторией, врач  Кульбакова О.М.

С уважением, ООО «Медицина для вас»